二氢吡啶类钙通道阻滞剂，俗称“地平”类降压药，是我国高血压患者使用最广泛的一类降压药，“地平”类药物成员众多，对于林林总总的地平类药物其具有结构通式如下所示。

作为一款降压药物，“地平”类药物杂质研究，尤其是N-亚硝胺杂质研究是否会让作为研究人员的你，血压不降反升？

N-亚硝胺杂质研究日益严格，对于地平类药物的N-亚硝胺杂质研究，你是否遇到过N-亚硝胺杂质苦苦难寻又或者N-亚硝胺杂质货不对板。本期文章来帮你答疑解惑，帮你梳理地平N-亚硝胺杂质的正确研究方法。

图1：地平类结构合集（部分）

#01地平类N-亚硝胺：只存在于理论中的案例

地平类药物作为二氢吡啶类钙通道阻滞剂，在化学结构上其具有一个可以发生“理论上“可以亚硝胺化的反应位点。那么对于其”理论上“存在的亚硝胺杂质肯定要进行研究以评估其风险例。

针对N-亚硝胺杂质的研究多个监管机构均出台了不同的评估方法。例如EMA在其N-亚硝胺的致癌效力分类方法 (the Carcinogenic Potency Categorization Approach, CPCA)中对N-亚硝胺杂质是否有邻位质子、是否邻位季碳以及效力指数对其进行了分类。

在EMA文件《Questions and answers for marketing authorisation holders/applicants on the CHMP Opinion for the Article 5(3) of Regulation (EC) No 726/2004 referral on nitrosamine impurities in human medicinal product》中，非洛地平 (Felodipine)被选为了案例进行评价流程的展示，并将所谓的非洛地平 (Felodipine)亚硝胺杂质被归类为5类。

图2：EMA效力计算举例（Calculation of potency score）

但是只有实际研究过该品种过的研究人员才会真正体会到非洛地平 (Felodipine)亚硝胺杂质的“危害”。

在众多的官方指南中对于N-亚硝胺杂质的评估多是基于理论计算或模拟估量，并未对真实世界条件下杂质存在的可能性进行评估。在QCS标准物质研发中心实验室已经尝试了多个地平类药物的亚硝胺杂质的合成与制备。但是我们很遗憾的发现，地平类结构亚硝胺杂质是无法稳定存在的。例如在我实验室尝试对尼莫地平 (Nimodipine)亚硝胺杂质合成尝试中，我们很遗憾的发现在众多亚硝胺合成条件下，与其的反应均无法发生，只能得到地平结构被氧化芳构化的产物。即使在经典亚硝胺化的条件下，当我们将尼莫地平原料药与亚硝酸钠的反应条件下，仅能观测到芳构化结构Nimodipine EP Impurity A（QCS货号RM-N131501，CSA号85677-93-6）的信号。以上实验结果在不同的地平类产品中均得到了重现，该结果与历史文献数据相符。

图3：QCS研发中心尼莫地平亚硝胺化合成报告

图4：QCS研发中心尼莫地平亚硝胺化试验记录

图5: QCS研发中心尼莫地平亚硝胺化LCMS数据

参考文献：

1. Schmidtsdorff et al. (2022 - DOI: 10.1002/ardp.202100435) tested 67 compounds in a forced degradation study performed with a four‐fold molar excess of sodium nitrite, relative to the drug substance, at pH 3–4 for 4 h at 37°C

2. Brambilla et al. (2007 - DOI: 10.1016/j.mrrev.2006.09.003) reviewed data on 182 drugs for their ability to react with nitrite in various experimental conditions

3. Gillat et al. (1984 - DOI: 10.1016/0278-6915(84)90005-x)

参考自：USP Nitrosamines Exchange

因此对于N-亚硝胺杂质研究中需要在研究方案中先加上一个第“0“步：该化合物是否稳定存在或可以被合成。

图6:QCS亚硝胺评估流程图优化

对于地平类化合物的亚硝胺杂质研究很多机构或群体已经发表了该杂质不可存在或无法合成的观点和结论。

相关文件

USP Nitrosamines Exchange

EFPIA立场文件

例如在USP亚硝胺Exchange论坛中已经有多例关于此类亚硝胺杂质的反馈，同时欧洲制药工业及协会联合会 (EFPIA )的立场文件里已经有类似于行业共识的文件发表，均表达了亚硝胺是不能稳定无法存在的观点。我们认为，地平类药物分子的亚硝胺杂质是不可获得的，现有市场上所谓的地平类亚硝胺杂质样品都是芳构化的错误产品。

图7：USP、EFPIA行业共识文件截图

#02N-亚硝胺可能性评估法替代标样对比法

因此，对于地平类药物研究人员我们建议采用反应可能性评估策略来替代不可能实现的标样对照策略。即通过将药物分子放置于标准的亚硝胺化合成反应条件（例如高浓度的亚硝酸钠和酸），证明即使在极强的亚硝胺化条件下也不会生成N-亚硝胺杂质，以此完成药物产品中亚硝胺杂质的评估。

QCS标准物质研发中心认为以下地平类亚硝胺杂质（图8）无法合成，建议相关项目中使用反应可能性评估策略。

图8：无法合成的地平类亚硝胺杂质系列

希望通过我们的一些实验数据和技术积累，能给客户提供一些数据帮助和理论建议。同时希望能让同行少踩同样的坑，希望能够为中国医药质量研究和标准物质研发做出一点贡献。（如需相关文献资料、行业共识文件，请联系对应销售人员）